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结核病诊断及免疫综合评估技术研究

来源:未知 时间:2020-07-13 16:04
一、国内外结核病现状及发展趋势
结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性呼吸道疾病,是严重危害社会和部队人群健康的传染病。全球结核病报告显示,每年有约1000万例结核病新发病例,其中90%为成人。WHO在2019-2023年的总体工作规划中,已经把结核病防治工作作为优先事项。随着全球结核病发病率的回升,对结核病的防治已引起各国高度重视。我国是结核病高发国家,每年新发结核病例占全球总数的16%,总数为全球第二位,呈现患病率高、死亡率高、耐药率高、年递降率低的现状。而中国华南地处热带和亚热带地区,常年高温高湿且变幅较小,尤其适合结核菌生长和传播,导致结核病高发。根据我院感染病科近五年临床接诊收治的结核病数据表明,结核病发生率呈明显的上升态势。

WHO2019全球结核病报告(中国数据)

二、结核病诊断技术的研究背景
  实验室检查在结核病防治中起着不可或缺的作用,包括以全菌体为靶标的病原微生物检测(如痰涂片镜检及MTB培养)、以细菌核酸为靶标的分子生物学检测和以机体免疫反应及其产物为基础的检测方法。
  结核病诊断的金标准就是标本中发现结核分枝杆菌。但检测时间需一个月,检测敏感性仍有限;且肺外结核病存在难于取材的问题,使得临床某些痰菌阴性的患者无法早期使用抗结核治疗。其他检测方法如X线检查仅提供影像学的辅助性诊断;结核菌素皮肤试验(TST)是利用检测结核分枝杆菌感染的细胞免疫功能的方法,结果判定均易受医生主观因素影响。近年来出现的基因诊断技术相对快速、敏感、特异,但对实验室条件和操作人员要求较高,不易推广。以及利用血清学检测来诊断结核已有较长历史,但检测方法需要改进。获得较快发展并广泛应用的以细胞免疫反应为基础的γ干扰素释放试验如T-SPOT与QuantiFERON-TB Gold检测,存在无法区分活动性结核病和潜伏性结核感染,无法预测潜伏性感染者的活动风险等问题。因此,亟需寻找准确度和灵敏度更高的实验室检测方法。

T-SPOT.TB检测

结核分枝杆菌抗酸染色图

痰涂片镜检图
 
三、我科开展的结核病诊断技术研究
  南部战区空军医院中心实验室曾为“全军传染病防治中心”“全军肝病中心”,具有多年传染病的研究基础。中心实验室在常规开展T-SPOT.TB检测技术的同时,结合最新分子生物学和免疫学方法,创新性开展结核病诊断新技术的科研项目。对新发结核和疑似感染患者的免疫功能状态进行全面、动态、量化评估,筛检对诊治效果有意义的代表性免疫评价关键指标,后续反馈临床指导调整治疗方案。此项目的顺利开展将会为结核的临床诊断和免疫检测等方面带来新的突破,能最大程度降低临床检测时间、提高实验室诊断的特异性和准确度。欢迎各临床科室和研究机构提供生物样本和开展共同合作研究。



 
四、Q&A
1.T-SPOT.TB的用途是什么?
T-SPOT.TB是一种更简单的酶联免疫斑点(ELISPOT)检测方法。ELISPOT检测是高灵敏度的,在细胞分泌的细胞因子扩散稀释前,其能够立即捕获细胞周围所分泌的细胞因子。这使得ELISPOT检测更加的灵敏,超过传统的ELISA实验。T-SPOT.TB被设计出来用于检测结核特异抗原刺激活化的效应T细胞。T-SPOT.TB计数每个活化的结核特异效应T细胞。
2.T-SPOT.TB检测多久出结果?
大多数实验室通常可以在收到样本后36-48小时内报告结果。
3.T-SPOT.TB检测的优势是什么?
T-SPOT.TB检测的灵敏度和特异性超过98%。T-SPOT.TB检测结果即使在特殊人群(包括接BCG接种和免疫功能低下的人群)中也是可靠的。
4.T-SPOT.TB检测适用于哪些人群?
T-SPOT.TB检测几乎适用于所有患者,包括HIV/AIDS,免疫系统低下, 近期密切接触者以及有高危因素的居民和雇员等。
5.T-SPOT.TB检测可以用于免疫系统功能低下的患者吗?
可以,T-SPOT.TB检测非常适合这类患者。由于每个样本在与TB特异性抗原孵育之前,都经过细胞计数,标准化来制备数量固定且已知的细胞悬浮液。T-SPOT.TB检测中使用的是外周血单个核细胞(PBMC),免疫功能低下患者的PBMC计数可能会减少。在这些患者中,可以合并多个采血管以获得执行检测所需的细胞数量。提交给美国食品和药物管理局(FDA)进行上市前批准的重要临床研究数据,广泛评估了免疫功能低下的个体中的T-SPOT.TB检测结果,包括但不限于HIV,矽肺,糖尿病,晚期肾病和器官移植的受试者。结核菌素皮肤试验阴性与免疫功能低下相关,相比之下T-SPOT.TB检测结果与免疫功能低下状态之间没有关联。
6.有哪些临床数据可以支持T-SPOT.TB?
T-SPOT.TB检测在各类患者人群中检测TB感染(潜伏性和活动性)性能的科学证据不断增长。目前已经发表了数百篇经同行评议的出版物,包括数篇荟萃分析,涉及广泛的临床和流行病学领域,包括:
•潜伏结核感染(“LTBI”)
•结核病(包括肺结核和肺外结核)
•HIV感染者
•抗TNF-α治疗
•医护人员筛查
•儿童、成人和老人
•营养不良的患者
•接受透析的肾病患者
•肿瘤患者
•低流行国家
•高流行国家
•密切接触者追踪
•移植患者
7.在接触结核分枝杆菌后多久,可使用T-SPOT.TB检测到感染?
暴露后转阳的时间间隔尚不明确,但预计转阳时间不会晚于结核菌素皮肤试验(TST)(通常2-8周)。
8.有既往结核病史的患者是否T-SPOT.TB检测一定是阳性?
不一定。并不是每个研究都能证明患者在结核病治疗后检测呈阴性。一些数据表明,很大一部分人的TST或血液检测呈阳性。一般地,临床治愈表为:痰培养阴性,症状改善和胸部X线改变。可能是结核杆菌完全的杀灭,也可能是返回静止期(潜伏性结核感染)。 T-SPOT.TB检测中受TB特异性抗原刺激的效应T细胞的持续存在可能提示存在休眠细菌,但需要进一步研究证实。如果患者在治疗后仍保持阳性,可根据要求考虑进行其他诊断测试和医学检查。
9.T-SPOT.TB检测能否检测出耐药结核病菌株(例如MDR TB,XDR TB或TDR TB)的感染?
可以,T-SPOT.TB检测可以检测到结核分枝杆菌复合群的所有菌株,包括 MDR TB,XDR TB和TDR TB。T-SPOT.TB检测中的抗原是所有结核分枝杆菌菌株共有的。
10.结核分枝杆菌以外的分枝杆菌感染是否会导致T-SPOT.TB检测结果阳性?
结核分枝杆菌是大多数结核病的病原体,因此,T-SPOT.TB测试的敏感性在活动性,经培养证实的结核分枝杆菌感染的受试者中毋庸置疑。大多数非结核分枝杆菌(NTM)均不存在ESAT6和CFP10抗原,但M. marinum, M. szulgai and M. kansasii除外。目前尚不清楚是否M. gordonae所有亚组的基因组中都存在ESAT6和CFP10,但该NTM也可能产生阳性结果。其他非结核分枝杆菌,例如M. avium,都不会与T-SPOT.TB的抗原发生交叉反应。

详情可咨询南部战区空军医院中心实验室
张主任61639578
霍老师61639561
蔡老师61639827
 
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